Карпеченко К.А.   Семенова В.А.   Землянухина О.А.   Карпеченко Н.А.  

Использование молекулярно-генетического метода на основе ПЦР для формоспецифичного анализа дуба (Ouercus robus)

Reporter: Карпеченко Н.А.

В настоящее время наряду с традиционными методами изучения древесных растений в селекционных и генетических исследованиях всё большее значение приобретают методы, основанные на выяснении изменчивости ДНК. Данные методы позволяют определить характер изменчивости генетического материала, что даёт возможность уже на ранних стадиях развития растения выявить особи с наиболее ярко выраженными искомыми качествами.
Известно, что клоновые лесосеменные плантации дуба черешчатого создаются либо посадкой желудей, полученных от плюсовых деревьев (улучшенный посадочный материал), либо с помощью прививок на специально выращенные подвои. Во втором случае часто наблюдается отторжение подвоя от привоя, причем этот процесс наблюдается даже у деревьев, достигнувших возраста плодоношения. Многолетними исследованиями НИИЛГиС показана высокая эффективность прививок колоновидного дуба на подвои основной формы дуба черешчатого. Установлено, что в потомстве колоновидной формы выщепляется до 30% особей с признаком «колоновидности». Поэтому выявление данной формы дуба на стадии сеянцев представляется важной задачей в практике селекции и создания подвоев на генетически совместимые привои. В качестве объектов исследования были выбраны случайные деревья дуба черешчатого и деревья дуба черешчатого формы колоновидной в возрасте 20 лет.

Для получения препаратов ДНК использовался метод, основанный на применении СТАВ-буфера. Визуализацию полученных препаратов проводили электрофоретическим методом с использованием агарозного геля и окрашивания бромистым этидием. Далее проводили ПЦР с использованием RAPD праймеров (PawS 5, PawS 16, PawS 6, PawS 17, Paw 11). Полученные ампликоны подвергали разделению в агарозном геле, окраску проводили бромистым этидием.

В результате выделения ДНК из образцов дуба черешчатого с использованием СТАВ метода удалось получить препарат тотальной ДНК (примерно 0,3 - 0,8 нг ДНК) высокого качества без признаков деградации. Применение ПЦР с RAPD- праймерами выявило спектр ампликонов для каждого образца в пределах от 5 до 12. Сравнение продуктов ПЦР разных форм дуба черешчатого обнаружило различие в структуре их геномов. Были показаны как индивидуальные отличия в геноме отдельных объектов, так и отличия, присущие только определённой форме внутри одного вида.

Таким образом, использование ПЦР с RAPD-праймерами даёт возможность ранней диагностики формоспецифичности дуба черешчатого для получения посадочного материала при создании ЛСП повышенной генетической ценности.
 


To reports list