Шейкина О.В.   Милютина Т.В.   Новиков П.С.  

Молекулярно-генетические исследования плюсовых деревьев ели на архиве клонов в республике Марий Эл

Reporter: Шейкина О.В.

Одним их способов сохранения генетического фонда древесных пород является создание архивов клонов плюсовых деревьев. Архивы клонов являются уникальными объектами, так как собранные на них плюсовые деревья могут иметь большое значение при восстановлении генетического разнообразия в будущем. В связи с эти уже сейчас необходимо изучить и оценить уровень генетической изменчивости отобранных в лесах России плюсовых деревьев.
Для оценки уровня генетической изменчивости плюсовых деревьев ели из Удмуртской Республики, Республики Марий Эл и Нижегородской области были использованы 4 ISSR маркера ((AC)8C; (CA)6GT; (CA)6AС и (СA)6AGСT). ДНК для анализа была выделена из хвои с использованием методики Doyle J. J. и Doyle J. L. [1]. ПЦР проводили на амплификаторе MJ MiniTM Gradient Thermal Cycler (BIO-RAD). Реакционная смесь объемом 10 мкл содержала: 1 мкл ПЦР-буфера; 0.2 мкл 10Мм dNTPs; 0.1 мкл 100 мкМ праймера; 1 мкл образца ДНК; 0.2 мкл Taq-полимеразы (2 ед/мкл); 7,5 мкл воды. Для проведения реакции использовали набор реактивов «Encyclo PCR kit» (Evrogen). Режим амплификации: 2 минуты при 40С; 45 циклов - 1.5 мин 94С, 0.5 мин 94С, 45 сек 60-65С, 1.5 мин 72С; 20 мин 72С. Электрофорез ПЦР продуктов проводили в 1.5% агарозных гелях в 1хТВЕ с бромистым этидием. Визуализацию ДНК, обработку и анализ полученных изображений проводили с помощью системы гель-документации GelDoc 2000 (BIO-RAD) с использованием программного пакета Quantity One® Version 4.6.3. Математическую обработку данных проводили в среде POPGENE Version 1.32.
Всего при изучении плюсовых деревьев было обнаружено 61 ISSR маркер, них 5 фрагментов получено при использовании праймера (AC)8C, 20 фрагментов для (CA)6GT и по 18 для (CA)6AС и (СA)6AGСT). Доля полиморфных ISSR маркеров составила 80.3%. Размеры ампликонов определялись по отношению к маркеру молекулярного веса 100 bp +1.5 + 3 Кb DNA Ladder (СибЭнзим-М) и варьировали от 110 до 2210bp. Для изученных плюсовых деревьев были установлены следующие генетические показатели: наблюдаемое число аллелей – 1.803, эффективное число аллелей 1.484, генетическое разнообразие по Нею (1973) – 0.2804, индекс Шеннона (1972) – 0.4190.

Список литературы
1. Doyle J.J. A rapid DNA isolation procedure for small quantities of fresh leaf tissue/Doyle J.J., Doyle J.L. Phytochemical Bulletin 19: 11-15.

 


To reports list